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　　qPCR實(shí)驗(yàn)：0.1 ml PCR 12聯(lián)管配熒光定量光學(xué)平蓋

　　這是一種專為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵耗材，其核心目的是在qPCR儀中進(jìn)行熒光信號(hào)采集時(shí)，實(shí)現(xiàn)高通量、低成本且可靠的檢測(cè)。

　　以下是詳細(xì)的介紹：

　　一、是什么?

　　這是一種通常由高透光的聚丙烯(PP)或聚酯薄膜制成的薄片狀蓋膜。它的一面涂有特殊的光學(xué)透明膠，另一面是超平滑的光學(xué)表面。

　　匹配性：它專為12聯(lián)管(也稱為12排管) 設(shè)計(jì)，尺寸匹配標(biāo)準(zhǔn)96孔板規(guī)格(SBS標(biāo)準(zhǔn))的12聯(lián)管架子。

　　功能：通過壓敏膠，將其緊密地粘貼在12聯(lián)管的管口上，形成一個(gè)光學(xué)平整的密封表面，并防止PCR過程中試劑的蒸發(fā)和交叉污染。

　　二、主要特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)

　　優(yōu)異的光學(xué)透性：

　　蓋膜具有的透光率，特別是在qPCR常用的熒光波長(zhǎng)范圍內(nèi)(如FAM, VIC, ROX, Cy5等)，確保熒光信號(hào)能被儀器光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)準(zhǔn)確、高效地捕獲，保證數(shù)據(jù)的精確性。

　　光學(xué)平整表面：

　　“平蓋"意味著其表面非常平整。這在qPCR中至關(guān)重要，因?yàn)閮x器的光學(xué)鏡頭在掃描時(shí)，其焦距是固定的。一個(gè)平整的蓋膜表面確保了每個(gè)孔到鏡頭的距離一致，避免了因高度差導(dǎo)致的信號(hào)聚焦不準(zhǔn)和信號(hào)衰減，從而保證了孔間數(shù)據(jù)的可比性和重復(fù)性。

　　密封防蒸發(fā)：

　　背面的壓敏膠能形成牢固的密封，有效防止PCR過程中高溫導(dǎo)致的水分蒸發(fā)。試劑蒸發(fā)會(huì)顯著改變反應(yīng)體系的濃度，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗(如Ct值不準(zhǔn)、反應(yīng)效率低下等)。

　　高通量與低成本：

　　這是其相對(duì)于單個(gè)硬質(zhì)穹頂蓋。使用硬質(zhì)蓋帽需要逐個(gè)手動(dòng)或使用壓蓋器扣蓋，非常耗時(shí)耗力。而光學(xué)平蓋可以一次性密封整排12個(gè)或整個(gè)96孔板，極大地提高了工作效率，特別適合大批量樣本檢測(cè)。

　　成本通常遠(yuǎn)低于購(gòu)買96個(gè)獨(dú)立的硬質(zhì)蓋帽。

　　防交叉污染：

　　良好的密封性也避免了氣溶膠的溢出，防止了孔與孔之間的交叉污染。

　　三、適用場(chǎng)景

　　高通量熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)：如基因表達(dá)分析(RT-qPCR)、病原體檢測(cè)、SNP分型等所有需要用到96孔板格式qPCR的實(shí)驗(yàn)。

　　使用標(biāo)準(zhǔn)12聯(lián)管(0.1 ml)和96孔板支架的各類qPCR儀，例如：

　　Applied Biosystems (ABI) 7500/7500 Fast, StepOnePlus, ViiA 7

　　QuantStudio 3/5/6/7 Pro

　　Bio-Rad CFX96, CFX Opus系列

　　Roche LightCycler 480

　　Eppendorf Mastercycler ep realplex

　　以及其他兼容96孔板的qPCR儀。

　　四、如何使用?

　　準(zhǔn)備：將反應(yīng)體系加入0.1 ml的12聯(lián)管中，并將聯(lián)管放入對(duì)應(yīng)的96孔板架子上。

　　撕取：從保護(hù)底紙上取下一張光學(xué)平蓋(通常為8聯(lián)排或12聯(lián)排的預(yù)切割蓋膜)。

　　覆蓋：將蓋膜有膠的一面朝下，仔細(xì)對(duì)齊管架的上緣，輕輕放下。

　　壓緊：使用提供的壓板工具或?qū)嶒?yàn)室常用的平板刮板，用力、均勻地刮壓蓋膜表面，確保每個(gè)管口都與蓋膜密封，沒有氣泡和褶皺。

　　檢測(cè)：將密封好的整個(gè)板架放入qPCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增和熒光采集。

　　五、選擇注意事項(xiàng)

　　兼容性：務(wù)必確認(rèn)光學(xué)平蓋與您實(shí)驗(yàn)室的qPCR儀型號(hào)兼容。不同儀器的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)可能對(duì)蓋子的透光率和厚度有特定要求。

　　粘合劑：優(yōu)質(zhì)的粘合劑應(yīng)能在PCR熱循環(huán)的高溫(通常最高105°C)下保持粘性，不會(huì)熔化、溢出或殘留難以清理的膠漬。

　　無核酸酶/無酶：確保產(chǎn)品經(jīng)過認(rèn)證，無核酸酶和無DNA/RNA酶污染，這對(duì)于敏感的qPCR實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要。

　　無熒光干擾：蓋膜自身不應(yīng)產(chǎn)生自發(fā)熒光，以免干擾熒光信號(hào)的采集，造成背景值過高。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，如需具體產(chǎn)品資料請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌商。

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